脱氢抗坏血酸和硼酸能形成络合物,不与OPDA反应,从而消除样品中荧光杂质的干扰 。该方法的更低检测限为0.022克/毫升 。
2.适用范围
该方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定 。
3.预防措施
3.1大多数植物组织含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶 。因此,应使用新鲜样品测定抗坏血酸,并尽快用偏磷酸盐-乙酸提取液匀浆以保存维生素c 。..
3.2有些果胶含量高的样品不易过滤,可采用抽滤的方法,或离心后过滤上清液 。
3.3活性炭可以将抗坏血酸氧化成脱氢抗坏血酸,但也可以吸附抗坏血酸,所以活性炭的用量要适当准确,要用天平称量 。我们的实验结果表明,2g活性炭可以将样品中的还原型抗坏血酸完全氧化脱氢,吸附效果不明显 。
2,2,6-二氯靛酚滴定法(还原VC)
1.原则:
还原抗坏血酸还原染料2,6-二氯靛酚,在酸性条件下呈红色,还原后消失 。在还原2,6-二氯靛酚后,被还原的抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸 。当无杂质干扰时,用一定量的样品提取液还原的标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比 。该方法用于测定还原型抗坏血酸,总抗坏血酸通常用2,4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定 。
2.预防措施
(1)所有试剂更好用蒸馏水制备;
2滴定时,可以同时吸收两个样品 。一个滴定,另一个作为观察颜色变化的参考;
(3)样品进入实验室后,应浸泡在已知量的2%草酸溶液中,防止氧化和维生素C的损失;
⑷罐头如果存放时间过长,可能含有大量的低铁离子(Fe2+),所以要用8%的醋酸代替2%的草酸 。此时,如果使用草酸,2,6-二氯靛酚可被低铁离子还原,增加了测定次数,使用乙酸可避免这种情况 。
⑸整个操作过程应迅速,避免还原型抗坏血酸氧化;
[6]处理各种样品时,如遇泡沫,可加入几滴辛醇消除;
一次,测定样品溶液时,需要做空白色对照,从样品溶液的滴定体积中减去空白色体积 。
优点:简单、快速、准确,适用于多种不同类型样品的分析 。缺点是不能直接测定样品中脱氢抗坏血酸和结合抗坏血酸的含量,且易受其他还原性物质的干扰 。如果样品含有色素,将很难观察到滴定终点 。在酸性环境中,抗坏血酸(还原型)能将染料2,6-DCIP还原成无色的还原型2,6-DCIP,抗坏血酸被氧化成脱氢抗坏血酸 。氧化的2,6-DCIP在中性或碱性溶液中呈蓝色,在酸性溶液中呈粉红色 。因此,当使用2,6-dicp滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时,在抗坏血酸完全氧化之前,滴下的2,6-dcip立即还原为无色 。一旦溶液中的抗坏血酸被完全氧化,滴加少量过量的2,6-DCIP立即使溶液呈现淡粉色或淡红色,这就是滴定终点,说明溶液中的抗坏血酸刚刚被完全氧化 。根据滴定过程中2,6-DCIP标准溶液的消耗量(ml ),可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量 。在稀草酸或偏磷酸溶液中,氧化的2,6-DCIP经常与还原的抗坏血酸反应 。即样品在一定浓度的酸性溶液中溶解或提取后,用2,6-DCIP标准溶液滴定至终点 。
食品和生物材料中常含有其他还原性物质,其中一些能还原和脱色2,6-DCIP 。为了消除这些还原性物质对定量测定的干扰,可以用抗坏血酸氧化酶破坏样品中的还原性抗坏血酸,然后用2,6-DCIP滴定样品中的其他还原性物质 。然后,当滴定未经酶处理的样品时,从2,6-DCIP标准溶液的总消耗量中减去2,6-DCIP标准溶液的消耗量,即滴定抗坏血酸实际消耗的2,6-DCIP标准溶液的体积,从而可以计算样品中抗坏血酸的含量 。此外,可以利用还原性物质如抗坏血酸和2,6-DCIP之间反应速度的差异,通过将样品溶液的pH控制在1-3的范围内,可以消除或减少其它还原性物质的影响 。通常,在这种条件下,干扰物质和2,6-DCIP之间的反应缓慢或被抑制 。生物体液(如血液、尿液)中抗坏血酸的测定比较困难,因为这些样品中抗坏血酸的含量很低,且还原性物质多,必须事先除去蛋白质 。生物液体中含有巯基、亚 *** 盐和硫代 *** 盐,它们都能与DCIP反应,但反应速度比抗坏血酸慢得多 。样品中巯基物质对定量测定的干扰,通常可通过加入对氯汞苯甲酸(简称PCMB)来消除 。
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