菌种保存用什么培养基 菌种保存( 三 )


(一)斜面低温保藏 该法的优点是保藏方便且所占空间较小 。具体做法是:菌丝长满斜面后 , 放在0~5℃保存 。以后每隔一定时间(2~3个月)转管一次 。转管保存不能长期用PDA培养基 , 否则种性易退化 , 灰树花降解木质纤维素的能力减弱 。因此隔一定时间(1年左右)须把菌种转接到木屑培养基上复壮 , 之后挑选健壮无污染的菌丝再转回PDA培养基保存 。在长期保存过程中 , 要防棉塞受潮滋生杂菌 。菌种试管口最好用蜡烫封 , 以防培养基内水分过快蒸发 。增加琼脂用量(2.5%~3%)可减缓水分蒸发 。还要防止菌种管上的标签脱落而造成种系混杂 。
斜面低温保藏方法简便易行 , 能随时观察保藏菌株的活力和纯度 , 一旦染杂 , 肉眼能及时发现 。
(二)自然基质保藏 此法是根据灰树花的特性 , 利用自然基质保藏其菌种的方法 。灰树花是木腐菌 , 可以采用以木屑为主料的培养基 。自然基质营养全面 , 且大部为缓释养分 , 不易产生营养过剩或饥饿;其次 , 培养基理化性状好 , 可吸收或缓冲菌丝代谢出的有害物质 , 水分与通气协调平衡 , 部分菌丝扎入基质内生长 , 不裸露于空气中 , 菌丝呼吸强度低 , 生命力强 。
1.原料与配方 粗、细木屑比例适当 , 采用板栗树木屑最佳 , 粗木屑粒径为2毫米左右 , 细木屑为一般圆盘锯屑 , 粗、细的比例为1∶2 , 添加干木屑重量20%的麸皮和1%的糖 , 含水率为60%左右 。这样的基质通气性好 , 营养丰富且供菌丝分解利用的时间长 , 长到基质内部的菌丝比包裹在基质外部暴露于空气中的菌丝耐受性强 。不同粒径的基质比例适当 , 还能协调气与水的矛盾 。粗粒过多 , 架空菌丝多;细粒过多 , 透气性差 , 菌丝生长慢 。应用配方如下:
栗木屑78% , 麸皮20% , 石膏1% , 蔗糖1% , 水65%配料 , 装入较粗大的试管中 , 装料量为试管的1/3~1/2 , 1.5千克/厘米2灭菌1.5小时 。冷却后 , 接入需保藏的菌种 , 在28℃下培养 , 待菌丝长满木屑培养基时取出换上无菌橡皮塞 , 在0~5℃冰箱内保藏1~2年转管一次 。
2.容器与装量 采用容量250毫升的葡萄糖玻璃瓶 , 清洗洁净 , 装量一般不超过玻璃瓶容量的3/5 , 填料不能过满 , 瓶壁所残留的颗粒须擦拭干净 , 否则保藏的菌种易引起污染 。
3.灭菌和冷藏 灭菌时若采用棉塞封口 , 基质表层易失水 , 接种成活率低 , 即使菌丝复活 , 生长也很缓慢 , 所以最好采用聚丙烯膜封口 , 接种后换用无菌棉塞培养 , 待菌丝长满后再换成有孔灭菌胶塞冰箱保藏 。
用上述方法保藏的菌种经3年贮放后 , 接出成活率均达90%以上 , 出菇验证产量及子实体形态特征均无明显变化 。因此 , 自然基质保藏法具有保存期长 , 菌种遗传性能相对稳定的特点 。
(三)木粒PDA斜面保藏 灰树花在自然状态下易发生于栗树根部 , 这说明其营养需求较为特殊 。根据灰树花这种习性 , 在PDA基础上添加适量的栗树木粒制成母种培养基 。在多年的使用中发现 , 用该培养基培养的母种生长势好 , 在转接原种时 , 适应能力强 , 萌发定植快;用作菌种保藏基质时 , 保藏时间长 , 并能很好保持菌种的优良性状 。