菌种保存用什么培养基 菌种保存( 二 )


3、载体保藏法:载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体 , 如土壤、沙子、硅胶、滤纸上 , 而后进行干燥的保藏法 , 例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛 。
4、寄主保藏法:寄主保藏法用于尚不能在人工培养基上生长的微生物 , 如病毒、立克次氏体、螺旋体等 , 它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代 , 此法相当于一般微生物的传代培养保藏法 。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏 。冷冻保藏法可分低温冰箱(-20—-30℃ , -50—-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法 。
5、甘油管保存法:甘油管冷冻保藏法是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的 。其方法是将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用 。将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液 。取1ml灭菌甘油放入与菌液充分混匀 , 使甘油浓度约为10%-30% , 于-70℃下冻存 。-20℃保存时间较短 。或采用体积比为8:2的甘油-生理盐水 , 加入新鲜培养的菌体肉汤 , 混合均匀后至-20℃冰箱保存 。该方法适用于一般细菌的保存 , 同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种 , 适用范围广 , 操作简便 , 效果好 , 无变异现象发生 。甘油-生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液 , 其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用 , 且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分 , 从而更好地保护了待保存的菌株 。
6、冷冻干燥保藏法:先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻 , 然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥) , 其中真空冷冻干燥法最常见 。真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素 , 除不宜于丝状真菌的菌丝体外 , 对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用 , 不宜用冻干法保存的微生物不到2% 。真空冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结 , 然后在真空条件下干燥 , 使微生物的生长和酶活动停止 。为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害 , 要采用保护剂来制备细胞悬液 , 使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质 , 通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型 。即是使样品中的水分在冰冻状态下 , 抽真空减压 , 使冻结的冰直接升华为水蒸气 , 使样品达到干燥 。干燥后的微生物在真空下封装 , 与空气隔绝 , 达到长期保藏的目的 。
常用的菌种保存方法有哪些?

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文章插图
菌种保藏是食用菌产业的一项基础工作 , 是确保野生种质资源基因留存和现有生产用种遗传性能相对稳定的必要手段 。菌种保藏的方法多种多样 , 有的虽然保藏效果好 , 但投资高或操作繁杂 。在生产实践中 , 更需要设备投入少 , 能保障菌种不死亡、不污染、最大限度地保持优良种性的简便方法 , 如斜面低温短期保藏和自然基质较长期保藏相结合的方法 。
一般而言 , 对母种进行长期保存 , 对原种进行短期保存 。须保证优良菌种的性状和活力不发生变异 , 不死亡 , 不被污染 , 确保其纯度 。因此 , 保存方法应具备取材容易、操作方便、菌种不易退化、长期保存不污染杂菌等优点 。常用的菌种保存方法如下: