蛋白质N端测序 _生活百科

蛋白质N端测序【蛋白质N端测序】蛋白质N端测序的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。
基本介绍中文名：蛋白质N端测序
意义：所有的蛋白质合成都起始于N-端
分类：非质谱技术
原理：Edman化学降解法
蛋白质意义几乎所有的蛋白质合成都起始于N-端，蛋白质N-端的序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着巨大的影响力。例如N-端序列影响蛋白质的半衰期，同时关联着蛋白亚细胞器定位等，这些与蛋白的功能和稳定性息息相关，对蛋白进行N-端测序分析，有利于帮助分析蛋白质的高级结构，揭示蛋白质的生物学功能。序列的方法目前对蛋白N端测序主要分类两大类，其一为非质谱技术，例如经典的Edman降解法、利用反转录RT-PCR得到对应蛋白的cDNA，再来反推得到蛋白序列；其二为质谱技术。各自都有其使用的长处和制约之处，目前，市面上採用的，依然是基于经典的Edman降解法原理，利用美国ABI公司Procise491蛋白序列测序系统进行蛋白N-端测序。测序的原理蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础的，Edman化学降解，其基本原理是包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基的偶联，苯氨基硫甲醯酞（PTC-肽）环化裂解，和噻唑呤酮苯氨（ATZ）转化为苯异硫尿胺基酸（PTH-胺基酸）三个主要的化学步骤，每个循环从蛋白质与多肽裂解一个胺基酸残基，同时暴露出新的游离的胺基酸进行下一个Edman降解，最后通过转移的PTH-胺基酸鉴定实现蛋白质序列的测定。