实验原理：植物叶片的主脉两侧对称部分叶面积基本相等，其形态和生理功能也基本一致 。用物理或化学方法处理叶柄或茎的韧皮部，保留木质部，以阻断叶片光合产物的外运，同时保证正常水分供应 。然后，将对称叶片的一侧取下置于暗中，另一侧留在植株上保持光照，继续光合作用 。一定时间后，测定光下和暗中叶片的干重差，即为光合作用的积累的干物质量 。通过公式计算出光合速率 。乘以系数后还可计算出C02的同化量 。
实验器材：任选户外一种植物 。剪刀 。4块湿纱布 。带盖磁盘 。30个小纸牌，去户外之前用铅笔编号（1~15；1~15） 。镊子 。打孔器 。铅笔 。记号笔 。12个称量瓶 。烘箱 。分析天平 。干燥器 。5％三氯乙酸 。
实验步骤： 1．取样：在户外选择较绿和较黄的同种植物叶片各15片，要注意叶龄、叶色、着生节位、叶脉两侧和受光条件的一致性 。绿叶和黄叶分别用纸牌编号（例如绿叶为1、2、3~15，黄叶为1`、2`、3`~15`） 。增加叶片的数目可提高测定的精确度 。
2．处理叶柄：为阻止叶片光合作用产物的外运，可选用以下方法破坏韧皮部 。
(1) 环割法：用刀片将叶柄的外层(韧皮部)环割0.5cm左右 。为防止叶片折断或改变方向，可用锡纸或塑料套管包起来保持叶柄原来的状态 。
(2) 烫伤法：用棉花球或纱布条在90℃以上的开水中浸一浸，然后在叶柄基部烫半分钟左右，出现明显的水浸状就表示烫伤完全 。若无水浸状出现可重复做一次 。对于韧皮部较厚的果树叶柄，可用融熔的热蜡烫伤一圈 。
（3）抑制法：用棉花球蘸取5％三氯乙酸或0.3mol/L的丙二酸涂抹叶柄一周 。本实验统一使用三氯乙酸 。注意勿使抑制液流到植株上 。
选用何种方法处理叶柄，视植物材料而定 。一般双子叶植物韧皮部和木质部容易分开宜采用环割法；单子叶植物如小麦和水稻韧皮部和木质部难以分开，宜使用烫伤法；而叶柄木质化程度低，易被折断叶片采用抑制法可得到较好的效果 。
3．剪取样品：叶柄处理完毕后即可剪取样品，并开始记录时间，进行光合作用的测定 。首先按编号次序（绿叶和黄叶交替进行）剪下叶片对称的一半(主脉留下)，并按顺序夹在湿润的纱布中（绿叶与黄叶分开保存），放入磁盘中，带回室内存于暗处 。2~3h后，再按原来的顺序依次剪下叶片的另一半 。按顺序夹在湿润的纱布中（绿叶与黄叶分开保存） 。注意两次剪叶速度应尽量保持一致，使各叶片经历相同的光照时间 。
4．称干重：取12个称量瓶分别标上绿叶光照1、2、3，绿叶黑暗1、2、3，黄叶光照1、2、3，黄叶黑暗1、2、3，将各同号叶片照光与暗中的两半叶叠在一起，用打孔器打取叶圆片，分别放入相应编号的称量瓶中（即光下和暗中的叶圆片分开） 。每5 个叶片打下的叶圆片放入一个称量瓶中，做为一个重复 。记录每个称量瓶中的小圆片数量 。打孔器直径根据叶片面积大小进行选择，尽可能多的打取叶圆片 。注意不要忘记用卡尺量打孔器的直径 。将称量瓶中叠在一起的叶圆片分散，开盖置于105℃烘箱中烘10min以快速杀死细胞，然后将温度降到70~80℃，烘干至恒重(2~4h左右) 。取后取出加盖于干燥器中冷却至室温，用分析天平称重 。
5．结果计算：
W2-W1光合速率(mgDW·m-2 s-1)= A×t
式中W2：照光半叶的叶圆片干重(mg)；W1：暗中半叶的叶圆片干重(mg)；A：叶圆片面积(m2)；t：照光时间(S) 。若将干物质重乘以系数1.5，便可得CO2的同化量，以mgC02·m -2S-1表示 。
7.证明光合作用暗反应第一产物是二**碳 。。。。。。这个真不会