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动物学实验【动物学实验】《动物学实验》是2010年浙江大学出版社出版的图书 ， 作者是姜乃澄、卢建平 。本书主要介绍了实验常用试剂、实验动物常见的处理方法等内容 。
基本介绍书名：动物学实验
作者：姜乃澄、卢建平
ISBN：9787308072540
页数： 218
定价：20.00
出版社：浙江大学出版社
出版时间：2010-6-1
装帧：平装胶版纸
开本： 16开
字 数：356000
实验常用试剂【反应剂】1、检验葡萄糖配方一本尼迪克（Benedict）溶液（1） 在400毫升蒸馏水中溶解85克柠檬酸钠和50克无水碳酸钠 。（2） 在50毫升加热的蒸馏水中溶解8.5克硫酸铜 。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中 ， 边加边搅拌 ， 如果产生沉澱 ， 要过滤 。本尼迪克溶液配製后能长期使用（存放时间较久而产生沉澱是 ， 取上层清液使用 ， 不必重新配製） 。本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖 ， 可测出0.15 ～0.20%的葡萄糖 。这种溶液跟未知物同加热时 ， 如果未知物中有葡萄糖 ， 会形成红色的氧化亚铜沉澱物 。配方二裴林（Fehling）溶液（1）把34.5克硫酸铜溶于500毫升蒸馏水中 。（2）把125克氢氧化钾（钠）和173克酒石酸钾钠溶解在500毫升蒸馏水中 。上述两种溶液应分别保存 。在检测葡萄糖时 ， 使他们等量的混合 ， 加入待测物的试管内 ， 加热到沸腾 。如果有葡萄糖 ， 会形成红色的氧化亚铜沉澱物 。2、检查澱粉的试剂 鲁哥氏（Lugol's）溶液（碘液）取6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中 ， 搅拌到溶解后 ， 加入4克碘 ， 等碘充分溶解 ， 在加入80毫升蒸馏水 ， 贮存在棕色试剂瓶内 。碘液用来测试食物样品或叶片中的澱粉 ， 也用作染色剂 ， 例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等 。3、检查蛋白质的试剂配方一 米伦（Millon）试剂在60毫升浓硝酸（比重1.42）中溶解40克汞（水浴加温可助溶） ， 溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释 ， 静置澄清后 ， 取它上层的清液备用 。这种试剂可长期保存 。在待测物中加入少量米伦试剂 ， 加热 ， 如果有蛋白质 ， 会出现红色 。这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质 。配方二 双缩尿试剂分别配製10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液 。在3毫升待测物中加入1毫升10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液 。如果有蛋白质 ， 会出现紫色反应 。4、检查脂肪的试剂苏丹Ⅲ（Ⅳ）酒精饱和溶液取0.2克苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ） ， 放入纯酒精中 ， 加热 ， 使它充分溶解 ， 成为饱和酒精溶液 ， 过滤后密闭在试剂瓶内保存备用 。5、酸硷指示剂配方一酚酞试剂和试纸酚酞试剂 取1克酚酞 ， 溶解在100毫升60%的酒精溶液里 ， 装在试剂瓶内密闭保存 。酚态试纸 取1克酚酞 ， 溶解在100毫升95%酒精溶液里 ， 加入00毫升蒸馏水 。把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后 ， 取出 ， 放在无氨气影响处晾乾 。酚泰试剂（试纸） pH值变色範围8.2～10 ， 在酸性和中性溶液中都无色 ， 再硷性溶液中呈深红色 。配方二红蓝石蕊试纸取市售石蕊1克 ， 放在80毫升10%酒精溶液中搅拌 ， 使它溶解 ， 然后过滤 。把滤液分成两份 。1份滴入稀磷酸或稀硫酸 ， 到出现红色为止 。另1份滴入稀氢氧化钠溶液 ， 到出现蓝色为止 。在上述製备的溶液中分别浸湿滤纸条 ， 随后取出滤纸条 ， 放在蔽光处、无酸硷性气体影响的地方晾乾 ， 即的红、蓝两种石蕊试纸 。红石蕊试纸在硷性溶液中变蓝 ， 蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红 。6、检查二氧化碳的试剂检查二氧化碳的试剂 ， 可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水 。配方一 溴代麝香草酚蓝溶液取0.1克溴代麝香草酚蓝 ， 溶解在100毫升蒸馏水里 ， 滴入少量0.1%氢氧化钾溶液 ， 使它成为弱硷性溶液而呈蓝色 。溴代麝香草酚蓝溶液pH值变色範围是6.0（黄）～7.6（蓝） 。待测物中如果有二氧化碳 ， 会形成碳酸而使溶液变成黄色 。配方二石灰水在蒸馏水中加入生石灰（氧化钙） ， 变加边搅拌 ， 直到加入的生石灰不再溶解 ， 呈饱和状态时为止 。在石灰水澄清后 ， 倾出上层清液 ， 用滤纸过滤 ， 放在密闭瓶内保存 。如果测定的物质中有二氧化碳 ， 会生成碳酸钙 ， 使石灰水变浑浊 。7、检查细胞生活力的试剂 检查细胞有无生活力 ， 可用中性红甲基蓝试剂 。配製的方法是先分别配製1%中性红溶液和1%甲基蓝溶液 ， 这两种溶液各取1份混合 ， 用来鉴定细胞的死活 。该试剂使活细胞的液泡染上红色 ， 而使死细胞全部染成蓝色 。常见处理方法实验动物的编号和分组一、编号实验动物常需要标记以示区别 。编号的方法很多 ， 根据动物的种类数量和观察时间长短等因素来选择合适的标记方法 。(一)挂牌法：将号码烙压在圆形或方形金属牌上(最好用铝或不鏽钢的,它可长期使用不生鏽),或将号码按实验分组编号烙在栓动物颈部的皮带上 ， 将此颈圈固定在动物颈部 。该法适用于狗等大型动物 。(二)打号法：用刺数钳(又称耳号钳)将号码打在动物耳朵上 。打号前用蘸有酒精的棉球擦净耳朵 ， 用耳号钳刺上号码 ， 然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹 。该法适用于耳朵比较大的兔、狗等动物 。(三)针刺法：用七号或八号针头蘸取少量碳素墨水 ， 在耳部、前后肢以及尾部等处刺入皮下 ， 在受刺部位留有一黑色标记 。该法适用于大小鼠、豚鼠等 。在实验动物数量少的情况下 ， 也可用于兔、狗等动物 。(四)化学药品涂染动物被毛法：经常套用的涂染化学药品有涂染红色：0.5%中性红或品红溶液涂染黄色：3-5%苦味酸溶液涂染黑色：煤焦油的酒精溶液根据实验分组编号的需要 ， 可用一种化学药品涂染实验动物动物背部被毛就可以 。如果实验动物数量较多 ， 则可以选择两种染料 。该方法对于实验周期短的实验动物较合适 ， 时间长了染料易退掉；对于哺乳期的子畜也不适合 ， 因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉 。(五)剪毛法：该法适用于大、中型动物 ， 如狗、兔等 。方法是用剪毛刀在动物一侧或背部剪出号码 ， 此法编号清楚可靠 ， 但只适于短期观察 。(六)打孔或剪缺口法：可用打孔机在兔耳一定位置打一小孔来表示一定的号码 。如用剪子剪缺口,应在剪后用滑石粉捻一下,以免癒合后看不出来 。该法可以编至1～ 9999号 ， 此种方法常在饲养大量动物时作为终身号採用 。二、分组(一)分组的原则：进行动物实验时 ， 经常需要将选择好的实验动物按研究的需要分成若干组 。动物分组应按随机分配的原则 ， 使每只动物都有同等机会被分配到各个实验组与对照组中去 ， 以避免各组之间的差别,影响实验结果 ， 特别是进行準确的统计检验,必须在随机分组的基础上进行 。每组动物数量应按实验周期长短、实验类型及统计学要求而定 。如果是慢性实验或需要定期处死动物进行检验的实验 ， 就要求选较多的动物 ， 以补足动物自然死亡和认为处死所丧失的数量 ， 确保实验结束时有合乎统计学要求的动物数量存在 。(二)建立对照组：分组时应建立对照组 。1.自身对照组：是指实验数据而言 。实验动物本身在实验处理前、后两个阶段的各项相关数据就分别是对照组和实验组的实验结果 ， 此法可排除生物间的个体差异 。2.平行对照组：有正对照组和负对照组两种 。给实验组动物某种处理 ， 而给正对照组用同样方法进行处理 ， 但并不採用实验所要求的药物或手段 ， 负对照组则不给任何处理 。3.具体分组时 ， 应避免人为因素, 随机把所有的动物进行编号 ， 然后令其双数为A组(实验组),单数为B组(对照组)即可或反之 。如果要分若干个组时 ， 应该用随机数字表示进行完全随机分组 。动物的除毛、给药方法一、实验动物的除毛在动物实验中 ， 被毛有时会影响实验操作与观察 ， 因此必须除去 。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脱毛等 。(一)剪毛法：剪毛法是将动物固定后 ， 先用蘸有水的纱布把被毛浸湿 ， 再用剪毛剪刀紧贴皮肤剪去被毛 。不可用手提起被毛 ， 以免剪破皮肤 。剪下的毛应集中放在一容器内 ， 防止到处飞扬 。给狗、羊等动物採血或新生乳牛放血製备血清常用此法 。(二)拔毛法：拔毛法是用拇指和食指拔去被毛的方法 。在兔耳缘静脉注射或尾静脉注射时常用此法 。(三)剃毛法：剃毛法是用剃毛刀剃去动物被毛的方法 。如动物被毛较长 ， 先要用剪刀将其剪短 ， 再用刷子蘸温肥皂水将剃毛部位浸透 ， 然后再用剃毛刀除毛 。本法适用于暴露外科手术区 。(四)脱毛法：脱毛法是用化学药品脱去动物被毛的方法 。首先将被毛剪短 ， 然后用棉球蘸取脱毛剂 ， 在所需部位涂一薄层 ， 2～3分钟后用温水洗去脱落的被毛 ， 用纱布擦乾 ， 再涂一层油脂即可 。适用于狗等大动物的脱毛剂配方为：硫化钠10g ， 生石灰15g ， 溶于100ml水中 。适用于兔、鼠等动物的脱毛剂的配方为：1. 硫化钠3g,肥皂粉1g,澱粉7g,加适量水调成糊状；2. 硫化钠8g,澱粉7g ， 糖4g ， 甘油5g ， 硼砂1g,加水75ml；3. 硫化钠8g溶于100ml水中 。二、实验动物的给药在动物实验中 ， 为了观察药物对机体功能、代谢及形态引起的变化 ， 常需要将药物注入动物体内 。给药的途径和方法多种多样 ， 可根据实验目的、实验动物种类和药物剂型、剂量等情况确定 。(一)注射给药法1. 皮下注射 注射时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤 ， 右手持注射器将针头刺入,固定后即可进行注射 。一般小鼠在背部或前肢腋下 ， 大鼠在背部或侧下腹部；豚鼠在后大腿内侧、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部注射；蛙可在脊背部淋巴囊注射；狗多在大腿外侧注射 ， 拔针时 ， 轻按针孔片刻 ， 防药液逸出 。2. 皮内注射 此法用于观察皮肤血管的通透性变化或观察皮内反应 。如将一定量的放射性同位素溶液、颜料或致炎物质、药物等注入皮内 ， 观察其消失速度和局部血液循环变化 ， 作为皮肤血管通透性观察指标之一 。方法是：将动物注射部位的毛剪去 ， 消毒后 ， 用皮试针头紧贴皮肤皮层刺入皮内 ， 然后使针头向上挑起并再稍刺入 ， 即可注射药液 。注射后可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘 。3. 肌肉注射 当给动物注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时,常採用肌肉注射 。肌肉注射一般选用肌肉发达、无大血管经过的部位 ， 多选臀部 。注射时针头要垂直快速刺入肌肉 ， 如无回血现象即可注射 。给大、小鼠作肌肉注射时 ， 选大腿外侧肌肉进行注射 。4. 腹腔注射 先将动物固定,腹部用酒精棉球擦试消毒 ， 然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下 ， 沿皮下向前推进约0.5厘米 ， 再使针头与皮肤呈45 度角方向穿过腹肌刺入腹腔 ， 此时有落空感 ， 回抽无肠液、尿液后 ， 缓缓推入药液 。此法大小鼠用的较多 。5. 静脉注射 是将药液直接注射于静脉管内 ， 使其随着血液分布全身,迅速奏效 。但排泄较快 ， 作用时间较短 。6. 淋巴囊注射 蛙类常採用此法,其皮下有数个淋巴囊 ， 注入药物甚易吸收 。腹部淋巴囊和头部淋巴囊常作为蛙类给药途径 。一般多选用腹部淋巴囊给药 。注射时将针头从蛙大腿上端刺入 ， 经大腿肌层入腹壁肌层 ， 再进入腹壁皮下 ， 即进入淋巴囊 ， 然后注入药液 。(二)经口给药法1. 口服法：把药物放入饲料或溶于饮水中让动物自动摄取 。此法优点在于简单方便 ， 缺点是不能保证剂量準确 。一般适用于对动物疾病的防治或某些药物的毒性实验 ， 製造某些与食物有关的人类疾病动物模型 。2. 灌胃法：在急性实验中,多採用灌胃法 。此法剂量準确 。灌胃法是用灌胃器将所应投给动物的药灌到动物胃内 。灌胃器由注射器和特殊的灌胃针构成 。小鼠的灌胃针长约4～5cm ， 直径为1mm ， 大鼠的灌胃针长约6～8cm ， 直径约1.2mm 。灌胃针的尖端焊有一小圆金属球 ， 金属球为中空的 。焊金属球的目的是防止针头刺入气管或损伤消化道 。针头金属球端弯曲成20°左右的角度 ， 以适应口腔、食道的生理弯曲度走向 。(三)其它途径给药方法 1. 呼吸道给药：呈粉尘、气体及蒸气或雾等状态的药物或毒气,均需要通过动物呼吸道给药 。如实验时给动物乙醚作吸入麻醉、用锯末烟雾製作慢性气管炎动物模型等 ， 特别在毒理学实验中套用更为广泛 。2. 皮肤给药：为了鉴定药物或毒物经皮肤的吸收作用、局部作用、 致敏作用和光感作用等 ， 均需採用经皮肤给药方法 。如兔和豚鼠常採用背部一定面积的皮肤脱毛后 ， 将一定的药液涂在皮肤上 ， 药液经皮肤吸收 。3. 脊髓腔内给药：此法主要用于锥管麻醉或抽取脑脊液 。4. 脑内给药：此法常用于微生物学动物实验,将病原体等接种于被检动物脑内 ， 然后观察接种后的各种变化 。5. 直肠内给药：此种方法常用于动物麻醉 。兔直肠内给药时,常採用灌肠的胶皮管或用14号导尿管代替 。6. 关节腔内给药：此法常用于关节炎的动物模型複製 。扩展知识无特定病原体（Specefic pathogen Free,SPF）动物是指机体内无特定的微生物和寄生虫存在的动物 ， 但非特定的微生物和寄生虫是容许存在的 。一般指无传染病的健康动物 ， 是目前国外使用最广泛的实验动物 ， 它的来源 ， 既可来自无菌动物繁育的后裔 ， 亦可经剖胎取后 ， 在隔离屏障设施的环境中 ， 由SPF亲代动物抚育 。它不带有对人或动物本身致病的微生物 ， 但不能排除可经胎盘屏障垂直传播的微生物 。由于用疫苗和药物进行预防及治疗 ， 或用淘汰带菌动物来作出SPF动物的方法并不实用（既浪费时间 ， 又难保确除病原） ， 故一般大多先培育无菌动物或悉生动物后 ， 再把其移到有封闭系统设施中去饲育繁殖 。原则上SPF动物室内不容许存在病原菌 ， 但在封闭的环境中 ， 难免有很多非病原性微生物会逐渐进入动物机体中去 ， 故亦有人把这个转移过程称之为通常动物化 。SPF动物的祖先是无菌动物 ， 按理来说 ， 无菌动物的子宫内和卵中是无菌的 ， 然而 ， 有些微生物实际上是通过其亲代传给胎儿的 ， 因此 ， 培育无菌动物和SPF动物之前 ， 就必须考虑这个问题 。即应该严格地选择剖腹产母体 ， 该动物应未感染上规定的各种微生物和寄生虫 ， 最好通过几代连续剖腹 ， 来培育原种无菌动物后再培育SPF动物 。“SPF”一词的含义是不明确的 ， 因为在特定条件下 ， “非”病原体是可以成为病原体的 。而且有些病原体缺乏有效的检查手段 。“SPF”是多年来使用的名称 。截至2013年还没有更好的统一的名称 ， 所以仍沿用 。有COBS（经剖腹产取得并饲养在屏障中的）、BS（在屏障系统中饲养）、DF（无病）等不同名称的 ， 都是指“SPF”动物 。内容简介根据我校教学实际和多年的教学经验 ， 本实验教材在保留22个实验的基础上 ， 又增加了2个基础实验 ， 分别是：“多细胞动物的早期胚胎髮育”及“乌贼的解剖” 。同时 ， 着力编写了5种常见无脊椎动物的解剖实验作为附录内容 ， 以增加高校动物学实验材料的选择度 ， 也供有兴趣的学生进一步学习和提高动物学实验技能之用 。为了能使学生在实验过程中最大限度地方便使用 ， 并在实验中做到独立观察和操作 ， 作者重新自绘、改绘及收录了实验用图364 ， 幅 ， 同时增加了複习思考和必要的作业题 ， 以巩固每一个动物实验的步骤、方法、技能 ， 并通过实验作业来加深对理论知识的理解和掌握 。目录实验1 显微镜的使用和动物的基本组织实验2 原生动物