鼠尾胶原【鼠尾胶原】鼠尾胶原是一种天然培养基,它具有促进体外培养细胞(特别是上皮细胞)贴壁的作用,同时它也是一种天然的黏附剂,当我们需要在培养瓶或培养皿内放置小玻片,製备细胞爬片时,可在瓶底涂一层胶原,再放上小玻片,自然乾燥后小玻片就固定于培养瓶之中 。
基本介绍中文名:鼠尾胶原
阐述:一种天然培养基
实验套用:原代培养耳蜗血管纹边缘细胞
类别:相关辞彙
实验製备
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实验目的:鼠尾胶原是一种天然培养基,它具有促进体外培养细胞(特别是上皮细胞)贴壁的作用,同时它也是一种天然的黏附剂,当我们需要在培养瓶或培养皿内放置小玻片,製备细胞爬片时,可在瓶底涂一层胶原,再放上小玻片,自然乾燥后小玻片就固定于培养瓶之中 。通过本实验可掌握鼠尾胶原的製备方法,以及如何切割小玻片,并利用鼠尾胶原将其固定于培养瓶内 。实验设备及材料:大鼠尾巴、剪刀、镊子、止血钳、弯头吸管、平皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、天平、生理盐水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、盖玻片、培养瓶、钻石笔、鼠尾胶原 。实验内容:1、製备鼠尾胶原(两个同学一组操作) 。2、切割小玻片 。3、利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内 。
![鼠尾胶原](http://img.gansulong.com/220811/0I0025M1-1.jpg)
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实验步骤:製备鼠尾胶原:1、取大鼠尾巴洗净,75%酒精浸泡5分钟;2、手持尾巴,用止血钳夹住鼠尾的尖端,折断尾骨后拉出尾腱;3、将尾腱剪断置于平皿中,生理盐水浸泡;4、重複步骤2、3,直至尾腱量够用;5、吸去生理盐水,将尾腱称重(0.5-1克);6、将尾腱置于平皿内剪碎,转移至三角烧瓶中;7、按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液;8、摇晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期;9、离心,4000转/分,10-15分钟;10、吸取上清,分装成小瓶,4℃保存 。鼠尾I型胶原蛋白
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简介鼠尾I型胶原蛋白(Collagenfromrattail,TypeI)系採用Birkedal-Hansen方法在无菌下製备,纯度达到95%以上,可溶于0.006mol/L乙酸 。本品可用于细胞培养皿的包被,特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养;也可用于製备三维胶原凝胶,使细胞在模拟的三维环境中生长 。质量标準1、SDS-PAGE分析纯度大于95% 。2、无菌检验结果为阴性 。3、本品2μg/cm2包被细胞培养皿后培养PC-12细胞,贴壁及生长正常 。4、本品浓度1mg/mL,pH7.0时形成具有一定强度的三维胶原凝胶,NIH-3T3细胞在三维凝胶内生长正常、PC-12细胞在三维凝胶表面生长正常 。使用方法1、细胞培养器皿的表面包被以包被浓度为2μg/cm2为例,用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL 。加到相应的培养器皿中,确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面 。开盖在超净台上过夜晾乾,也可以在室温放置1小时后,用PBS洗3~4次后直接使用 。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三个月以上的时间 。2、三维胶原凝胶的製备A、无细胞三维胶原凝胶的製备(以配製1mg/mL三维胶1mL为例)将200μL本品加到置于冰浴的离心管中,加入690μL双蒸水,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀 。再加入100μL10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要测定pH值) 。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后,转移到培养箱内 。如果配製中使用的是10×PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡 。B、含细胞三维胶原凝胶的製备(以配製1mg/mL三维胶1mL为例)準备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中 。将200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀 。再加入23μL10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要测定pH值) 。加入760μL的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中 。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养 。本品在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要儘量保持低温 。保存条件4℃保存,切勿冻存,有效期一年 。实验套用
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