细胞株构建流程 细胞株构建( 二 )


大剂量药物休克法的优点是接近大剂量化疗药物休克的临床治疗,缺点是大剂量药物休克法的药物浓度很高,细胞培养可能因外界环境突变而难以承受,细胞状态难以控制,耐药性不稳定 。
2)增加药物浓度的方法:对数生长期(汇合度为60%-80%)的肿瘤细胞加入低初始药物浓度(亲代细胞系IC50的1/10-1/5)24h,弃去培养基,用PBS洗涤两次,更换不含药物的培养基 。细胞恢复生长后,消化并传代培养24小时作为低浓度细胞 。当细胞在该浓度下稳定生长后,增加药物浓度以继续培养,并依次增加药物浓度 。药物诱导持续6-8个月,直到细胞能在药物浓度下稳定生长 。
增加药物浓度法的优点是诱导耐药细胞的药物剂量是渐进的,细胞培养的外部环境是逐渐变化的,细胞的耐受性更强,状态良好,但缺点是诱导耐药的过程需要较长的时间,化疗药物的作用方式不同于化疗药物大剂量、短疗程的临床化疗原则 。
c、检测耐药细胞系的IC50 。
检测耐药细胞系的IC50,根据IC50值计算 (RI),其中RI=耐药细胞系的IC50/亲本细胞系的IC50,RI5认为耐药细胞系的耐药性符合耐药细胞系的要求 。
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