核蛋白( 二 ) _生活百科

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核蛋白核定位序列（核定位信号，NLS）：亲核蛋白一般都含有特殊的胺基酸序列，这些内含的短肽保证了整个蛋白质能够通过核孔複合体转运到细胞核内，这段具有“定向”、“定位”作用的序列被称为核定位序列。核输出信号（NES）：作为核内物质输出细胞核的信号，帮助核内某些分子迅速通过核孔进入细胞质，位于核内合成然后被运输到细胞质工作的分子中。循环活化的胺基酸在核糖体上，以mRNA为模板合成多肽链的过程。蛋白质合成形式，是指核糖体大小亚基在需要的时候组合形成核糖体，合成蛋白质后解体并在需要的时候重新组合形成核糖体的过程核蛋白体循环ribosomal cycle：广义的核蛋白体循环是指胺基酸活化后，在核蛋白体上缩合形成多肽链的过程，该过程包括肽链合成的起始，肽链的延长，肽链合成的终止和释放，狭义的核蛋白体循环指多肽链合成过程中肽链延长阶段，它由进位，成肽和转位3个步骤循环进行，直至终止阶段。提取方法细胞和动物组织核蛋白的提取方法产品组成 310001 310002规格 50 assays 100 assaysBuffer A (Cytoplasmic Extraction Reagent) 10ml 20mlBuffer B (Nuclear Extraction Reagent) 10ml 20ml蛋白酶抑制剂混合物 250ul 500ul使用方法：A．细胞蛋白提取1. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，儘可能吸乾，收集细胞。2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后儘可能吸乾上清。3. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的Buffer A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10分钟。4. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟。5. 快速将上清吸入另一预冷的乾净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰柜保存备用。6. 在沉澱中加入200μl冷的Buffer B，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒。7. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。8. 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。9. 快速将上清吸入另一预冷的乾净离心管，即可得到核蛋白。B．组织蛋白提取1. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的乾净离心管。2. 在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，弃上清。3. 按照细胞蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰柜保存备用。注意事项：1. 实验过程中的所有BestBio-贝博生物试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰柜预冷。2. 整个过程须保持样品处于低温状态。储存条件：-20℃保存。有效期：一年。